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酶定性鉴定

酶定性鉴定

【鉴定原理】:酶可与溶解于平板中的底物作用,产生水解圈,观察水解圈的大小,可以定量地确定酶地种类。
【试剂制备】:
 1.缓冲液
①0.1mol/L柠檬酸:21.01g柠檬酸溶于1L水(A)
②0.1mol/L磷酸钠:38.01g磷酸钠溶于1L水(B)
③135mlA+365mlB制成PH值为10的缓冲液
 2.淀粉酶鉴定用培养基
100ml上述缓冲液加入1g琼脂糖及1g可溶淀粉,煮沸后倒平板。
 3.蛋白酶鉴定用培养基
50ml上述缓冲液加入1g琼脂糖煮沸,降温至55℃,加入0.5g干酪素融解后倒平板。
 4.碘液显色剂
碘液显色
碘储液:11g碘及22g碘化钾溶于50ml 55℃缓冲溶液中
碘液显色剂:2ml碘储液加2g碘化钾,溶于500ml水中
【酶 鉴 定】:
100g待测酶溶于1L自来水制成100g/L的溶液,取20μl待测液加入打好孔的待测酶种的平板小孔中,盖好平板盖,45℃,1h。
蛋白酶鉴定:观察水解圈大小与对照比较,水解圈大于对照水解圈,表明有蛋白酶存在。
淀粉酶鉴定:需以碘液显色,如显蓝紫色则表明在待测液中存在淀粉酶。
【适用范围】:无法区分同一种类的不同酶。

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